今天來為重慶市無菌檢驗員培訓學員說說革蘭氏染色法（Gram Staining）。革蘭氏染色法（Gram Staining）是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法。這種染色法利用細菌細胞壁上的生物化學性質不同，將細菌分成兩類，即革蘭氏陽性（Gram
Positive，G+）與革蘭氏陰性（Gram Negative，G-），一起來看正文。
一、革蘭氏染色法實驗原理
通過結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙，因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色。
革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
二、革蘭氏染色法實驗步驟
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法如下：
1.制片：固定，操作同上；
2.初染：滴加草酸銨結晶紫染色1min，水洗；
3.媒染：滴加革蘭氏碘液（碘-碘化鉀溶液）染色1min，水洗；
4.脫色：滴加體積分數(shù)為95%的乙醇，約45s后水洗；
5.復染：滴加番紅染液染色3min，水洗并使之干燥；
6.鏡檢：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。
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